HIV感染的檢查方法有哪些？

HIV感染的檢查方法有哪些？艾滋病的檢測應(yīng)注意窗口期的問題，從艾滋病病毒進(jìn)入人體到血液中產(chǎn)生足夠量的、能用檢測方法查出艾滋病病毒抗體之間的這段時期，稱為窗口期。在窗口期雖測不到艾滋病病毒抗體，但體內(nèi)已有艾滋病病毒，因此處于窗口期的感染者同樣具有傳染性。

實驗室檢查

樣品采集

艾滋病檢測最常用的樣本是血液，有時唾液或尿液也可作測試標(biāo)本。

常用標(biāo)本的采集方法如下：

1、血清樣品采集：用注射器抽出3-5ml靜脈血，室溫下自然放置1-2小時，待血清和血塊收縮后再用3000rpm離心15分鐘，吸出血清備用。

2、標(biāo)本采集時應(yīng)注意個人防護(hù)，防止職業(yè)暴露的發(fā)生。

樣本保存及運輸

1、保存和運送：血清標(biāo)本應(yīng)保存于4℃以下，如需長期保存，需置低溫（-30℃至-80℃）。其運送過程也應(yīng)保持低溫狀態(tài)。

2、樣本的保存和運送應(yīng)符合生物安全的要求。

樣本檢測

基層艾滋病檢測主要是血清抗體檢測。

1、初篩實驗的常用檢測方法

（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗

（2）明膠顆粒凝集試驗（PA）

2、確認(rèn)實驗的常用檢測方法

免疫印跡試驗

3、其他檢測方法：PCR

血常規(guī)

常有紅細(xì)胞，血紅蛋白降低，呈輕度正色素、正細(xì)胞性貧血。白細(xì)胞常降至4.0×109/L以下。分類中性粒細(xì)胞增加，有核左移現(xiàn)象。少數(shù)表現(xiàn)為粒細(xì)胞減少。淋巴細(xì)胞明顯減少，多<1.0×109/L 。有漿細(xì)胞樣淋巴細(xì)胞和含空泡的單核細(xì)胞出現(xiàn)。血小板一般無變化，一旦有變化，血小板可明顯減少。

免疫學(xué)變化

以細(xì)胞免疫系統(tǒng)變化為主，其特征如下。

（1）淋巴細(xì)胞亞群檢查：CD4T細(xì)胞減少，CD4/CD8比例下降，正常人CD4/CD8之比為1.75～2.1，而獲得性免疫缺陷綜合征患者常<1.0。

（2）T細(xì)胞功能下降：遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)性皮試陰性。體外非特異性有絲分裂原刺激時，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化降低。T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用降低。T細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-2和干擾素γ減少。

（3）B細(xì)胞功能失調(diào)：有不同程度的免疫球蛋白及免疫復(fù)合物升高。出現(xiàn)自身抗體，如產(chǎn)生RF、抗核抗體和抗淋巴細(xì)胞抗體等。

（4）自然殺傷細(xì)胞活性下降。

β2 -微球蛋白和新蝶呤（neopterin）

用放射免疫法（RIA）測定血清β2微球蛋白和新蝶呤。它們是被激活的巨噬細(xì)胞的產(chǎn)物，其血清水平的升高意味著免疫激活，具有與CD4T細(xì)胞絕對計數(shù)、淋巴細(xì)胞百分率、CD4/CD8細(xì)胞比例下降同樣的臨床意義，即預(yù)示病情進(jìn)展至獲得性免疫缺陷綜合征。

淋巴結(jié)活檢

在獲得性免疫缺陷綜合征的高發(fā)地區(qū)及高危人群中，對腹股溝以外部位的淋巴結(jié)腫大，特別是持續(xù)性頸部淋巴結(jié)腫大的人普遍進(jìn)行淋巴結(jié)活檢是重要的措施，可見到淋巴結(jié)的反應(yīng)性病變和腫瘤性病變等非特異的、但具有一定診斷價值的病理表現(xiàn)。有的獲得性免疫缺陷綜合征患者，表淺淋巴結(jié)消失，不易做活檢。

其他

小便檢查常有蛋白尿。血中肌酸酐和尿素氮可升高。

病原學(xué)檢查

PCR可用來追蹤HIV的自然感染史。可在其它血清學(xué)和病毒學(xué)標(biāo)志出現(xiàn)前檢測病毒序列，這樣可判定無癥狀而且血清陰性患者潛在的HIV的傳播性；可用來監(jiān)測長潛伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治療期間病毒的水平；也可用于HIV-1血清陽性母親的嬰兒的HIV檢測。在嬰兒出生后最初的6～9個月期間，他們的血液中存在母體的抗體，因此用PCR可判定嬰兒是否真正被HIV感染。

血清抗體陽性病人HIV序列的檢測

有人從AIDS或ARC病人的外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)物，精液細(xì)胞和精液上清制備DNA。然后用PCR法和逆轉(zhuǎn)錄酶測定法分別檢測HIV-1。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與32P標(biāo)記的探針退火之后用BstNI消化。再進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳和自顯影。結(jié)果表明，在逆轉(zhuǎn)錄酶陰性的28個細(xì)胞系中有9個以及用逆轉(zhuǎn)錄酶法不能確定的9個細(xì)胞系中有2個為陽性。這說明過去許多細(xì)胞培養(yǎng)物認(rèn)為是陰性者，實際上用更敏感的PCR測定時則為陽性。

從血清陽性的HIV感染者的外周血單核細(xì)胞中可檢測出前病毒序列。通過共培養(yǎng)分離出病毒的血清陽性的同性戀男人血液制備的DNA，用PCR可100%檢出病毒序列；用血清陰性共培養(yǎng)陰性同性戀者的標(biāo)本，經(jīng)PCR擴(kuò)增檢出病毒序列者為64%，血清陰性正常人標(biāo)本PCR檢測也為陰性，表明未出現(xiàn)假陽性結(jié)果。由于HIV-1基因組的廣泛的異源性，為提高檢測的陽性率可采用多種引物（如LTR，gag和env基因的引物）。利用PCR法從313份已證實為抗體陽性的標(biāo)本中檢測出310份HIV陽性（99%）。

血清抗體陰性病人的HIV序列的檢測

由于在感染HIV后到出現(xiàn)免疫反應(yīng)之前有一段滯后期，這個血清學(xué)陰性的滯后期通常長達(dá)6周至6個月，而且無抗體產(chǎn)生期可能更長些。在此期間受感染者往往檢測不到抗體，因此，血清陰性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中檢測到HIV-1比由血清學(xué)轉(zhuǎn)陽確診的時間可以提高6個月。對少數(shù)初次共培養(yǎng)呈陰性的人，甚至可在血清轉(zhuǎn)陽之前24～39個月就能確診為HIV-1感染。對血清學(xué)試驗結(jié)果不能確定者，也可通過PCR作進(jìn)一步分析和確診。

新生兒HIV序列的檢測

HIV感染的母親其嬰兒由于母體抗體的存在，用抗體檢測法通常為陽性。但實際上只有20%～60%的嬰兒受到HIV感染。因此，對這些嬰兒進(jìn)行HIV感染的早期診斷是十分重要的?，F(xiàn)已證明30～50%的這些新生兒可在母親的子宮里，在分娩和引產(chǎn)或通過產(chǎn)后哺乳時從其母體感染HIV。新生兒血清陽性者并不能說明是HIV感染。因為母體HIV抗體可持續(xù)大約15個月之久。在一般情況下，嬰兒并不表現(xiàn)出HIV感染的任何癥狀。病毒細(xì)胞培養(yǎng)法對嬰兒并不是一種可靠實用的方法；HIV特異IgM抗體的檢測在母體抗體存在下也是不可能的；在過量血清抗體存在下檢出血清中的HIV抗原也是十分困難的。另外，嬰幼兒被HIV感染后病情發(fā)展較快。早期診斷，對及時采取治療措施，延緩阻止病情發(fā)展極為重要。目前所使用的抗病毒藥毒性大，因而不能用于HIV抗體陽性而未感染的嬰幼兒。但當(dāng)用PCR檢測出HIV-DNA序列后，即可進(jìn)行抗病毒治療以及加強免疫機(jī)能和營養(yǎng)的治療。在一項研究中，14名血清陽性母親的新生兒用PCR檢測其中6個為陽性；在出生后12～15個月內(nèi)血清陰性的10個兒童中有5個為PCR陽性。從血清陽性母親出生1個月的新生兒中，收集的外周血單核細(xì)胞經(jīng)PCR檢測，7個為陽性的嬰兒，其中5個在檢測后10個月得AIDS;而PCR陰性的9個嬰兒，在16個月的追蹤檢查期間身體狀況良好。這些研究表明，PCR技術(shù)對被HIV感染母親的新生兒和血清陰性兒童進(jìn)行早期的直接的HIV-1檢測是十分重要的。

PCR技術(shù)檢測HIV-DNA序列對AIDS和ARC的確診起著重要作用。但也有人認(rèn)為 對已知HIV抗體、抗原或培養(yǎng)陽性的病人不必再做PCR。最合適的PCR檢測對象是那些疑有HIV感染但又缺乏確切的血清學(xué)依據(jù)的人群，如上述的HIV陽性母親所生的嬰兒，陽性患者的性伴侶，靜脈吸毒者和可疑的血清反應(yīng)者。PCR技術(shù)還可用來檢測血液制品及疫苗中有無HIV。

HIV-1的病原學(xué)檢查

①HIV-1血清抗體的檢測：包括抗-gp120及抗-P24，大多數(shù)HIV-1感染者在3個月內(nèi)血清抗體陽轉(zhuǎn)。因而，測定血清抗體是目前確定有無HIV感染的最簡便、快速而有效的方法。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），間接免疫熒光測定（IFA），放射免疫試驗（RIA）等。一般多用ELISA法作初查，其靈敏性為99.5%。但由于它是用HIV-1作為抗原進(jìn)行檢測，與淋巴細(xì)胞抗原有交叉抗體，可有假陽性出現(xiàn)。故對初查陽性者，再用硝酸纖維膜免疫印跡試驗（Westen blot，WB）確認(rèn)。

硝酸纖維膜雜交試驗特異性強，假陽性率極低。其診斷標(biāo)準(zhǔn)是：如ELISA連續(xù)兩次陽性，且WB檢測出現(xiàn)p24，gp41，gp120或gp160條帶中任何兩條條帶陽性者，則可確認(rèn)為HIV感染。如沒有兩條條帶陽性者，則只能診為“未定型”（indeterminate pattern）。這時可用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測其特異的病毒核酸，或繼續(xù)密切觀察，反復(fù)作上述檢測，以明確診斷。

②檢測病毒抗原：由于抗體出現(xiàn)晚于抗原，因而不能早期診斷。如果在抗HIV-1陽轉(zhuǎn)之前的窗口期篩選獻(xiàn)血員，就會出現(xiàn)假陰性，后果是非常嚴(yán)重的。因此，篩選獻(xiàn)血員最好加測病毒抗原。通常檢測P24，其靈敏性及特異性均較高。既有助于早期診斷，也可用于獻(xiàn)血員篩選、藥物療效考核等。

③檢測病毒核酸：在抗HIV-1陽轉(zhuǎn)之前的窗口期，還可用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測HIV RNA。此法靈敏度更高，檢測周期短，也有助于早期發(fā)現(xiàn)、獻(xiàn)血員篩選、藥物療效考核等。但操作必須十分小心，防止污染，以避免假陽性。

④病毒分離和培養(yǎng)：從患者的淋巴細(xì)胞、血液、精液及其他體液中均可分離出病毒，陽性率較高，反復(fù)多次分離陽性率可達(dá)100%。分離的病毒可用CD4T細(xì)胞培養(yǎng)。但方法復(fù)雜，成本較高，一般只用于實驗室研究。分離或培養(yǎng)到HIV均為確診的依據(jù)。

HIV-2的病原學(xué)檢查

血清學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)約80%的HIV- 1和HIV-2感染之間存在交叉反應(yīng)。故用于檢測HIV-1感染的ELISA和RIBA法難以確定HIV-2感染。特別是發(fā)生了HIV-l和HIV-2雙重感染時，使診斷更為困難。不過，HIV-2特異的ELISA及WB法藥盒現(xiàn)已有商品出售。在HIV-2流行區(qū)，可在檢測HIV-1的基礎(chǔ)上，先用HIV-2特異的ELISA藥盒區(qū)別HIV-1和HIV-2感染，再用HIV-2特異的WB法作確認(rèn)試驗。在非流行區(qū)，當(dāng)HIV-1試驗陽性或弱陽性，而WB法不明確或陰性，或臨床懷疑獲得性免疫缺陷綜合征，而HIV-1試驗弱陽性、WB法陰性時，也要用HIV-2特異的ELISA藥盒檢測，以明確診斷。

近來為了節(jié)省時間和經(jīng)費，大部分試劑盒廠家和血庫采用HIV-1和HIV-2抗體聯(lián)合測定。聯(lián)合測定的ELISA模式與HIV-1抗體測定相同，不同的是在包被固相載體時用HIV-1和HIV-2二種抗原的混合物替代單一的HIV-1抗原。

輔助檢查

獲得性免疫缺陷綜合征極易并發(fā)機(jī)會性感染和惡性腫瘤，并常死于這些并發(fā)癥。因此，對本病患者進(jìn)行胸部及胃腸道X線檢查，及早作出機(jī)會性感染和惡性腫瘤的診斷，對及時治療和延長患者的生命是十分重要的。

胸部X線檢查

常見的機(jī)會性感染有卡氏肺孢菌肺炎，惡性腫瘤有卡波齊（Kaposi）肉瘤。

（1）卡氏肺孢菌肺炎

典型X線表現(xiàn)是：初起時兩肺先出現(xiàn)混合性肺泡及間質(zhì)炎性改變，以肺門周圍散在性網(wǎng)狀結(jié)節(jié)樣間質(zhì)浸潤為主，從肺門向外擴(kuò)展。隨后在數(shù)日內(nèi)病變進(jìn)入肺泡，發(fā)展成肺泡性實變，在肺野內(nèi)形成均勻斑片狀實變影，其間夾雜有廣泛性或局灶性肺氣腫或小段肺不張，以肺外圍最明顯。呈粗糙的或細(xì)顆粒狀的“毛玻璃樣”表現(xiàn)，病變可僅限于一個肺葉，也可彌漫分布。有時片狀陰影可融合成大片狀均勻致密的浸潤影，呈向心性分布，與肺水腫的X線特征很相似。也可在“毛玻璃樣”背景上出現(xiàn)結(jié)節(jié)狀病灶。在肺周圍還可有條狀陰影，有些則僅表現(xiàn)為粗結(jié)節(jié)陰影。但這些X線表現(xiàn)沒有特異性，確診需要反復(fù)經(jīng)纖維支氣管鏡檢找到病原。不典型X線表現(xiàn)有：肺大葉性實變，可一葉也可多葉實變；肺空腔形成或胸腔積液；肺泡內(nèi)滲出物亦可鈣化等。應(yīng)注意與肺結(jié)核或肺部真菌感染相鑒別。胸內(nèi)淋巴結(jié)增大，主要是位于縱隔、右氣管旁及兩側(cè)肺門的淋巴結(jié)增大。有的病例甚至無呼吸系統(tǒng)癥狀出現(xiàn)，而僅于X線片上顯示胸內(nèi)淋巴結(jié)增大，以后才被證實為獲得性免疫缺陷綜合征。此種X線表現(xiàn)強烈提示肺內(nèi)有嚴(yán)重感染或腫瘤存在，需作纖維支氣管鏡或淋巴結(jié)活檢。

（2）卡波齊肉瘤

最常見的X線異常是肺間質(zhì)浸潤，約占肺卡波齊肉瘤患者的80%。此外，可見肺野內(nèi)直徑<1cm的、境界不清楚的多發(fā)性小結(jié)節(jié)影及明顯的條狀陰影。常伴有縱隔及肺門淋巴結(jié)增大，也可有胸腔積液。當(dāng)X線表現(xiàn)不明顯時，CT檢查有助診斷。

消化道X線檢查

胃腸道機(jī)會性感染主要的病原體是巨細(xì)胞病毒，惡性腫瘤仍以卡波齊肉瘤為常見。

（1）巨細(xì)胞病毒感染

巨細(xì)胞病毒可侵犯胃腸道的任何部位，但以結(jié)腸最為常見，個別病例可累及整個胃腸道。巨細(xì)胞病毒性食管炎或胃炎在X線片上表現(xiàn)為黏膜皺襞腫脹，小的充盈缺損及淺表潰瘍或糜爛等。巨細(xì)胞病毒性結(jié)腸炎病變有散在性及局灶性兩種。散在性者病變侵犯整個胃腸道，但程度不一。鋇灌腸示結(jié)腸袋形消失，腸腔輕度狹窄，腸黏膜可有肉芽腫、糜爛及淺表潰瘍等。節(jié)段性者以侵犯盲腸及末端回腸為主。X線造影顯示盲腸痙攣，黏膜皺襞不規(guī)則增厚及表淺的鵝口瘡樣潰瘍，但應(yīng)與潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病的X線表現(xiàn)相鑒別。上述X線表現(xiàn)均為非特異性的，應(yīng)結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。必要時應(yīng)配合內(nèi)鏡加活檢以確診。

（2）卡波齊肉瘤

卡波齊肉瘤可發(fā)生在胃腸道的任何部位。食管卡波齊肉瘤在X線片上顯示食管中段呈多發(fā)性腔內(nèi)息肉樣病變。胃卡波齊肉瘤表現(xiàn)為胃遠(yuǎn)端散在性、多發(fā)性無蒂的黏膜下缺損，輪廓光滑，直徑幾毫米至幾厘米。少數(shù)病變中央有鋇劑積聚，顯示“牛眼征”，在充氣擴(kuò)張的胃內(nèi)還可見不規(guī)則增厚的黏膜皺襞。十二指腸卡波齊肉瘤為球部內(nèi)黏膜下結(jié)節(jié)或輕度斑片狀隆起。小腸卡波齊肉瘤為多發(fā)性結(jié)節(jié)伴中央潰瘍。結(jié)腸卡波齊肉瘤以直腸最明顯，表現(xiàn)為整個結(jié)腸黏膜下散在的結(jié)節(jié)狀充盈缺損，直徑幾毫米至幾厘米不等。較晚期患者結(jié)節(jié)融合和環(huán)形浸潤腸壁，使直腸狹窄和僵直。